Sintesis asam nukleat ditindakake kanthi nggunakake metode trigliserida amida sialik fase padhet, ing ngendi ujung 3' DNA diimobilisasi ing substrat fase padat lan nukleotida ditambahake ing arah 3' nganti 5' nganti fragmen DNA sing dikarepake disintesis. .Iki beda karo sintesis DNA kanthi aplikasi DNA polimerase.
Pungkasan 3' saka basa pisanan diimobilisasi ing CPG sajrone sintesis, 5'-OH saka basa sabanjure dilindhungi karo di-p-tolyl trityl DMT, gugus amino ing basa kasebut dilindhungi karo asam benzoat lan 3'. -OH banjur diaktifake karo senyawa amino fosfat.1 basa saka 5 5′-OH saka 1 basa lan 3′-OH saka basa sabanjuré mbentuk trigliserida fosfit, kang banjur dioksidasi karo yodium kanggo trigliserida fosfat, protèktif ing basa liya 5′-OH dibusak dening nambah siklus DM asam dichloroacetic liwat tambahan saka basa sabanjuré, lan sawise sintesis protectant ing 5′-OH dibusak karo asam lemah. karo amonium hidroksida klempakan ing panas, amonium hidroksida dibusak, pecahan wis vakum pepe, lan asam nukleat diresiki dening kromatografi Cairan utawa PAGE.
Langkah-langkah Sintesis Oligo
Deblocking
Ing5 pungkasan DMT nglindhungi klompok dibusak kanthi nambah solusi TCA.
Aktifake
Campuran aktivator karo monomer oligonukleotida kanggo mbentuk intermediet monomer oligonukleotida aktif.
Kopling
Gugus hidroksil 5-terminal bereaksi karo perantara oligonukleotida aktif ing reaksi kondensasi anti-generatif kanggo mbentuk ikatan trigliserida fosfat sing ora stabil.
Capping
Penambahan agen capping nindakake reaksi capping asetilasi kanthi gugus hidroksil sing berlebihan sing ora melu reaksi kondensasi.
Oksidasi
Penambahan larutan yodium sing ngandhut banyu bereaksi karo ikatan fosfat sing ora stabil kanthi oksidasi kanggo mbentuk ikatan trigliserida asam fosfat sing stabil.
Pembelahan Cyanoethyl
Produk asam nukleat sawise sintesis, kanthi tambahan solusi DEA kanggo mbusak gugus sianoetil saka ikatan trigliserida fosfat.
Dibuwang & Deproteksi
Pecahan asam nukleat dipisah saka pembawa fase padhet kanthi nambahake larutan amonium hidroksida pekat lan banjur dipanasake kanggo mbusak gugus pelindung saka ikatan hidrogen basa.
Wektu kirim: Nov-21-2022