Prinsip dhasar sintesis DNA

Sintesis DNA kimia adhedhasar strategi sintesis fase padat lan kimia fosforamidit.Beda karo sintesis DNA biologis, materi ing sintesis DNA kimia yaiku DMT (4, 4-dimethoxytrityl) lan deoxyriboxyside sing dimodifikasi fosforamidit, kaya sing ditampilake ing Gambar 1. Sintesis DNA ditindakake kanthi dhukungan sing padhet (kita bisa menehi macem-macemKolom Sintesis Oligo), yaiku CPG (kaca pori sing dikontrol) lan PS (polystyrene), lan sintesis kabeh ditindakake ingsintesis DNA/RNA, yaiku peralatan utama kita, duwe model sing beda kayata: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 lan liya-liyane, arah sintesis saka 3 'nganti 5', lan nukleotida dikenalake menyang dhukungan sing padhet liwat siji. siklus sintesis.Siklus sintesis biasane ngemot papat langkah, Deprotection, Coupling, Capping lan Oksidasi (Gambar 2).Deprotection disetel kanggo mbusak gugus DMT ing dhukungan padhet utawa gugus hidroksil 5' ing nukleosida sadurunge, asam trikloroasetat 3% ing diklorometana digunakake minangka reagen deproteksi.Banjur deoxyriboxyside diowahi fosforamidit diijini kanggo mbukak gugus hidroksil kanthi bantuan aktivator, yaiku 5-ethylthiotetrazol utawa 4, 5-dicyanoimidazole, mbentuk phosphitetriester (III), lan nyadari langkah Coupling.Langkah Capping ditindakake kanggo mblokir gugus hidroksil sing ora reaksi sajrone langkah kopling, kanggo nyuda pembentukan urutan cacat sing ora dikarepake.Pungkasan, phosphitetriester (III) sing ora stabil dioksidasi dadi phosphotriester stabil kimia (V) kanthi yodium minangka oksidan ing saiki piridin.

DNA sing disintesis bisa dipecah saka dhukungan padhet kanthi aminolisis, gugus sing dilindhungi 2-cyanoethyl ing phosphotriester lan amida ing nukleobase dibelah bebarengan, Plat Sintesis lan Kolom Sintesis ing rak diselehake langsung ing kamar reaksi. sakaPeralatan Deproteksi.DNA mentah bisa disiapake dening HPLC, elektroforesis lan OPC yen dikarepake, kita uga bisa menehi sampeyanPeralatan Purifikasikanggo Post-Processing.